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Cy5.5微泡的超声应用

2025-05-09

Cy5.5标记的IgG抗体和Cy5.5染料的大小变化以及抗体和化疗药物在癌症中的代表性。Cy5.5标记的IgG[分子量(MW) = 150 kDa]是一个较大的分子,与用于癌症治疗的抗体大小相似,而Cy5.5染料(MW = 1.1 kDa)是一个较小的分子,与用于癌症治疗的化疗药物相当。此后,这些荧光示踪剂将被称为小(Cy5.5染料)或大(Cy5.5标记的IgG)分子剂。据估计,这些Cy5.5分子的小分子和大分子在血液中的半衰期分别为20分钟和11天。利用先前微泡介导的超声治疗研究的优化参数作为基线,诱导荧光示踪剂在体内的肿瘤摄取。定制的实验超声装置包括一个无聚焦的19毫米(0.75英寸)单元件浸入式传感器,与示波器,信号发生器和功率放大器相连接。超声参数包括:1.0 MHz发射频率,5分钟曝光持续时间,5 s脉冲重复周期,20%占空比,机械指数(MI)为0.5 (22 mW/cm2)。老鼠浸泡在定制的37°C水浴中,并在整个超声成像过程中保持异氟烷气体麻醉。每只老鼠首先被麻醉,然后绑在一块定制的木板上。这块板子上有一个端口,在老鼠被放置在板子上的整个过程中,都能源源不断地向老鼠输送异氟醚。将板子以30°角浸泡在水浴中(小鼠除头部外的整个身体都浸泡在水中),换能器垂直于肿瘤放置。小鼠在37°C水浴中接受小(25 μL, 10−3 M)或大(25 μL染料标记抗体,10−7 M)荧光分子和未包被微泡介导的微泡超声治疗。Cy5.5标记的IgG分子稀释度为10 μL / 1 ×106细胞。使用分光光度计计算IgG分子上的荧光量,因为产品说明书中没有给出这一信息。虽然小分子组和大分子组的摩尔浓度不相同,但在实验过程中使用相同批次完成治疗,并将所有治疗进展与相同量的对照注射进行比较,从而允许适当的标准化来计算治疗增益。将微泡(30 μL)和荧光分子(25 μL)的组合混合,用生理盐水稀释至总容积为100 μL。该混合物(100 μL)通过尾静脉丸注同时静脉给药。对照组小鼠进行假治疗(即不接受超声暴露,但保持与治疗组相同的条件,包括注射微泡和荧光分子)。在整个微泡介导的超声治疗过程中,动物被控制在异氟醚麻醉下在完成微泡介导的超声或假治疗后,每只小鼠在治疗后1、10、30和60分钟使用专用的小动物光学成像系统(Pearl Impulse)进行瞬时成像。“Pearl Impulse”光学成像系统是一个封闭配置,配有冷却电荷耦合相机,可通过激光激发和近红外荧光探测实现深度目标成像。成像使用近红外窗口700 nm通道,在685 nm波长激发,720 nm波长发射。在每个成像时间点,动物在异氟醚麻醉下维持。每只动物侧躺,肿瘤一侧在腔室内朝上。检索每个时间点的一张图像(同时采集小鼠的灰度图像和荧光强度)。在每个成像序列之间唤醒小鼠。随着时间的推移,肿瘤逐渐成像的能力允许测量局部荧光示踪剂的摄取和任何治疗诱导的效应。荧光强度采用Pearl Impulse软件2.0版(LI-COR Biotechnology)对肿瘤进行区域(ROI)分析。在每个肿瘤周围画一个ROI(这是对每个图像单独进行的,因为在鼠标定位上可能有细微的差异)。然后,使用Pearl Impulse软件,测量该ROI内的总荧光强度。然后通过其总像素计数将每个ROI归一化,以量化平均瘤内荧光。将来自小分子和大分子组的所有测量结果与对照对照进行比较,以定量确定荧光示踪剂的摄取和保留。对肿瘤样本的空间变化进行定性分析。

南京星叶生物自主研发了US-Star超声微泡造影剂系列,其中就包括多种载cy5、cy7等荧光微泡。